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从“蛋白表达”到“真实酶活”——Z-Phe-Arg-4MβNA荧光底物检测方案
2026/8/28 15:14:17 浏览量(82)Z-Phe-Arg-4MβNA
一、只看表达量,看不见真正的酶活
很多做组织蛋白酶 B/L(Cathepsin B/L)项目的研发人员都有过类似经历:
• Western blot、qPCR都做了,蛋白“有”也“高表达”
• 换到功能实验,却发现表型并不匹配预期
• 试剂盒像黑箱,想搭建自己的酶活模型,却无从下手
原因在于,Cathepsin这类蛋白酶的表达水平与实际酶活并不能完全画等号。
蛋白酶在细胞内以无活性的酶原形式合成,需要经过蛋白水解切割才能被激活。Western blot检测的是总蛋白量(包括酶原和成熟酶),qPCR反映的是转录水平——它们能够反映“有多少”,却不能直接回答“有多少处于活性状态”。
要做检测试剂开发、要做抑制剂筛选、要搭建可复现、可放大的体外评价体系,你需要的不是一个“现成结果”,而是一条可靠、经典、可控的——荧光底物链路。
二、Z-Phe-Arg-4MβNA:从一段序列讲起
Z-Phe-Arg-4MβNA·HCl(CAS:100900-17-2)是一类4MβNA(4-甲氧基-β-萘胺)标记的多肽荧光底物,结构由三部分构成:
• Z-:N端保护基,构成底物结构的一部分
• Phe-Arg:经典的Cathepsin B/L识别序列
• 4MβNA:被酶切释放后产生荧光信号的报告基团
具体工作原理如下:
1. 在合适的缓冲条件下,Cathepsin B/L/S等半胱氨酸蛋白酶识别Phe-Arg序列,并在Arg位点附近切割。
2. 酶切后释放4MβNA,并在相应检测体系中产生可检测的荧光信号,从而用于反映蛋白酶活性。
3. 通过监测检测信号的变化,可对底物水解程度及蛋白酶活性进行分析。
简单来说:酶越活跃,切得越快,荧光信号越强。 加入候选抑制剂后,可通过检测信号变化评价其对蛋白酶活性的影响。
由于P1位是Arg,底物也能被部分胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶(Trypsin-like Proteases)识别,包括:
• 血浆激肽释放酶(Plasma Kallikrein)
• 纤溶酶(Plasmin)
• 胰蛋白酶(Trypsin)
• 其他Arg特异性丝氨酸蛋白酶
因此,Z-Phe-Arg-4MβNA底物,可以同时服务于组织蛋白酶家族和胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶两套检测体系。
三、产品信息
中文名:Z-苯丙氨酸-精氨酸-4MβNA · 盐酸
英文名:Z-Phe-Arg-4MβNA Hydrochloride
简 称:Z-Phe-Arg-4MβNA · HCl
CAS号:100900-17-2
分子式:C34H39ClN6O5
分子量:647.17
规 格:1 g / 5 g / 25 g(支持定制包装)
形 态:类白色结晶粉末
货 号:G04030017
信 号:荧光
四、从酶活检测到抑制剂筛选,经典底物如何进入研发体系
作为一个经长期文献验证的经典底物,Z-Phe-Arg-4MβNA可以支撑三类典型应用场景:
1. Cathepsin B/L/S酶活检测试剂开发
用于建立蛋白酶活性的定量分析方法,支持组织蛋白酶检测试剂盒及相关酶活检测体系的研发与高通量检测体系的构建。
可解决以下开发需求:
• Cathepsin B/L/S活性检测方法建立
• 组织蛋白酶检测试剂盒研发
• 高通量检测平台构建
2. 组织蛋白酶抑制剂筛选与药物研发
构建组织蛋白酶酶活评价模型,用于候选化合物抑制活性的研究与评价。
典型应用包括:
• Cathepsin B/L抑制剂筛选
• 候选化合物活性评价
3. 胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶研究
利用其Arg识别特性,深入开展胰蛋白酶活性分析、激肽释放酶研究、纤溶酶研究以及底物特异性探讨。
适用于:
• 胰蛋白酶、纤溶酶、激肽释放酶活性分析
• 蛋白酶底物特异性与动力学研究
五、为什么研发人员仍然会选择经典底物?
✅ Cathepsin检测经典底物,文献应用成熟
Z-Phe-Arg序列长期用于Cathepsin B/L相关研究,具有较成熟的文献应用基础,便于研发与科研人员直接参考经典文献,快速、稳定地建立蛋白酶活性定量分析与检测方法。
✅ 4MβNA 荧光信号,检测灵敏度高
酶切后释放4MβNA荧光产物,可通过荧光信号变化反映底物水解程度,适用于蛋白酶活性分析及微量样本检测等场景。能满足高通量药物筛选等高灵敏度检测需求。
✅ 双类蛋白酶覆盖,应用范围广泛
单款底物即可兼容组织蛋白酶与部分丝氨酸蛋白酶分析,拓展产品在不同蛋白酶酶学体系中的应用范围。
✅ 高纯度工艺控制,批间一致性优异
金赛途严格控制生产工艺与杂质残留,确保产品具有高纯度与优异的批间稳定性,保障酶活分析与高通量药物筛选实验数据的重复性与可靠性。
扩展服务
以经典底物,连接Cathepsin表达与酶活研究。
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